肝素在临床上被广泛用作相关疾病的预防和治疗药剂,HPLC法测定利伐沙班片的含量和有关物质 

肝素是一种高度硫酸化的黏多糖,能够和抗凝血酶结合从而大大增强抗凝血酶对凝血酶和其他凝聚因子的抑制作用。肝素在临床上被广泛用作相关疾病的预防和治疗药剂,尤其是用作手术中的抗凝血剂。过量使用肝素会引起诸如大出血、血小板减少、高血钾、骨质疏松等副作用,因此肝素的剂量必须得到严格的监控。临床上用于肝素定量检测的方法有活化凝血时间法和活化部分凝血活酶时间法等。然而这些方法用于肝素检测具有耗时长、价格昂贵、间接检测、数据不够可靠等缺点。针对这些问题,我校现代工程与应用科学学院魏辉教授课题组发展了一种高效检测肝素浓度的有机分子荧光探针TPE-1,该探针结合酶处理还可以对肝素中可能存在的重大污染物多硫酸软骨素进行定量检测。相关研究成果于2015年7月23日在线发表于
Chemical Science (Ding Y. B., Shi L. L., Wei H., A “Turn On” Fluorescent
Probe for Heparin and Its Oversulfated Chondroitin Sulfate Contaminant,
Chemical Science, 2015, doi: 10.1039/c5sc01675d.)
之后得到了国际同行的好评:“this smart strategy will generate a large
array of light up biosensors with outstanding performance—Ben Zhong
Tang from the Hong Kong University of Science and Technology”; “this
interesting work will inspire the development of molecular probes and
assays for biomolecules with high selectivity and sensitivity—Kenneth
Kam-Wing Lo from the City University of Hong Kong”。并被Chemistry
World,Scientific American,Xtalks News等进行了跟踪报道。

利伐沙班 Rivaroxaban

图片 1

张 鹏 (黑龙江省牡丹江市动物卫生监督所 157000)

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1 止血和凝血机制

分子式:C19H18ClN3O5S  分子量:435.88

在生理状态下,血液中有少量纤维蛋白生成,并覆盖在血管内膜上,保护血管内皮,以维持血管的正常通透性,同时生成的纤维蛋白又被纤维蛋白溶酶所溶解,凝血与纤溶处于动态平衡状态,保持机体不出血,也无血栓形成,血液是流体状态而循环于全身。当这种平衡失调时,便可导致出血不止或形成血栓,即止血与凝血障碍。止、凝血障碍的机制十分复杂,其涉及微血管、血小板、各凝血因子、抗凝因子及纤维蛋白溶解系统等诸多因素。在正常时止、凝血系统与抗凝血和纤维蛋白溶解系统处于动态平衡状态,遂能既无出血也无血栓形成。若止、凝血活性减弱或抗凝血及纤溶活性增强则会引起低凝状态发生出血症状。相反会引起高凝状态或导致血栓形成。前者临床上统称为出血性疾病,后者统称为血栓性疾病。

HPLC法测定利伐沙班片的含量和有关物质 Determination of content and
related substances of rivaroxaban tablets by HPLC.

2 凝血功能检查

药物分析杂志 ,Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis ,2015年04期

凝血时间测定。静脉血放在玻璃试管中,观察自采血开始至血凝所需的时间称为凝血时间。该试验是反映自因子Ⅶ被负电荷表面激活,至纤维蛋白形成,一连串的复杂酶反应所需的时间,主要反映内源性凝血过程第一期有无异常。在大手术或肝、脾穿刺前进行本项测定,可以及早发现出血性素质疾病,以防大量出血。凝血时间延长,血浆内任何一种凝血因子的缺陷,几乎都可引起凝血时间延长,见于凝血因子Ⅷ、Ⅸ、维生素K缺乏及伴有弥漫性血管内凝血的重剧疾病等。

【摘 
 要】
目的:建立利伐沙班片的含量和有关物质的HPLC法。方法:采用RP-HPLC法测定利伐沙班片中利伐沙班的含量,并对其有关物质进行检测。色谱柱为Ultimate
LP-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.01
mol·L-1磷酸溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,柱温30℃,检测波长250
nm;同时采用NP-HPLC法测定利伐沙班片中R-利伐沙班的含量,色谱柱为CHIRALPAKAD-H(250
mm×4.6 mm,5μm),以甲基叔丁基醚-异丙醇-二乙胺(70∶30∶0.1)为流动相,流速0.8 m
L·min-1,柱温30℃,检测波长250
nm。结果:RP-HPLC法中主峰和相邻杂质峰能完全分离,利伐沙班的线性范围为0.009
6~0.167 mg·m
L-1,平均回收率(n=9)为99.7%;NP-HPLC法中R-利伐沙班与利伐沙班能完全分离,R-利伐沙班的线性范围为1.78~5.35μg·m
L-1,平均回收率(n=9)为100.7%。3批样品含量测定结果分别为99.1%、99.9%、100.2%,单个最大杂质分别为0.03%、0.06%、0.14%,总杂质分别为0.10%、0.13%、0.19%;3批样品中R-利伐沙班的含量分别为0.023%、0.021%、0.020%。结论:经方法学验证,本方法可用于利伐沙班片的质量控制。

出血时间测定。出血时间是指皮肤毛细血管经人工刺伤出血后到自然止血所需的时间。出血时间的长短主要与血管壁的完整性,收缩功能,血小板数量与功能,血浆中含量等有关。上述各种因素有缺陷时,出血时间可见延长。方法是在动物的耳尖部剪毛消毒后,用细针头刺入3~4毫米,血液即自动流出,每隔半分钟,用滤纸吸取血滴1次,如此,则纸上血迹逐渐缩小,出血停止时则不再留有血迹。计算血液流出到血迹消失之间的时间,即为出血时间。本法试验的出血时间,正常马为2~3分钟。当血小板大量减少,肝脏受损害,维生素K缺乏可使出血时间延长,动物患血斑病时,出血时间可显著延长到20~30分钟。

HPLC法测定利伐沙班原料药的有关物质.Determination of Related Substances
in Rivaroxaban by HPLC

活化部分凝血活酶时间测定。组织凝血活酶是脂蛋白,用于测定凝血酶原时间,这种完整的脂蛋白称为完全凝血活酶。用氯仿或乙醚自完全凝血活酶中浸提出来的物质则称为部分凝血活酶,其参与Ⅸa和Ⅹa的凝血作用。该试验是在血浆巾加入APTT试剂(接触因子激活物和磷脂)和钙离子后,观察其凝血时间。如以白陶土为接触因子激活物,也可称为白陶土部分凝血活酶时间。本试验是内源性凝血功能的综合性检查。

臧红芬; 王倩倩;常州制药厂有限公司; 广东化工 ,Guangdong Chemical
Industry , 2017年24期

临床检查时,应与健康动物进行对照试验,判定在延长时间10秒以上为异常(www.nczfj.com)。APTT延长主要见于严重的肝脏疾病、维生素K缺乏、DIC等。血浆凝血酶原时间测定,通常称为凝血酶原时间测定。在被检血浆中加入钙离子和第Ⅲ因子,测定其凝固时间即血浆凝血酶原时间,外源性凝血系统中因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ质或量异常时影响此试验,是外源性凝血活性的综合性检查。PT缩短见于血液高凝状态如DIC早期、乙醚麻醉后等。PT延长主要见于严重的肝脏疾病、维生素K缺乏、DIC后期等。

【摘要】
目的:建立测定利伐沙班原料药的有关物质的HPLC方法。方法:采用Waters XBridge
RP18(250*4.6 mm,5μm)色谱柱,采用梯度洗脱方式进行洗脱;0.1
mol/L的磷酸二氢钠-乙腈(95∶5)为流动相A,乙腈为流动相B,检测波长240
nm,柱温30℃,流速1.0
mL/min。结果:利伐沙班及其已知杂质(杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F)在浓度0.15~3.0μg/m
L范围内线性关系良好。平均回收率分别为94.7%、95.8%、100.6%、96.4%、96.9%。结论:该方法专属性强、灵敏度高、操作简便,适用于利伐沙班原料药有关物质的测定。

3 抗凝功能检查

利伐沙班中苯胺类潜在基因毒性杂质的HPLC法测定 Determination of aniline
potentially genotoxic impurity in rivaroxaban by HPLC.

凝血酶凝固时间测定。在被检血浆中加入标准凝血酶溶液,测定其凝固时间即凝血酶凝固时间。当纤维蛋白原明显减少或有结构异常,或血循环中有抗凝血物质时,该试验时间延长。其临床意义主要见于循环血液中AT-Ⅲ活性明显增高,严重肝脏疾病、过敏性休克及发生DIC时。

 药物分析杂志 ,Chinese
Journal of Pharmaceutical
Analysis ,2017年01期

抗凝血酶-Ⅲ测定。常用的方法有凝血法、免疫学检查法、酶学测定法等。凝血法,将除去纤维蛋白原的被检血浆和一定量的凝血酶相互反应后,凝血酶的一部分被检标本中的AT-Ⅲ中和而失去活性,再加入纤维蛋白原溶液测定其凝固时间,此时间决定于剩余凝血酶的含量。免疫学检查法,有AT-Ⅲ抗体进行单相免疫扩散、胶乳凝集、火箭电泳、激光散射测浊或近红外比浊等方法加以测定,得出AT-Ⅲ的抗原含量。酶学测定法,在标本中加入一定量的肝素,形成AT-Ⅲ肝素复合物,此复合物即迅速地和凝血酶结合成为AT-Ⅲ肝素凝血酶复合物,被结合的凝血酶即失去活性,再加入对凝血酶特异性很高的产色肽合成基质,以测定剩余凝血酶的活性,由此估算AT-Ⅲ的抗凝血酶活性。

【摘要】 目的:建立高效液相色谱法测定利伐沙班中苯胺类潜在基因毒性杂质4-(4-氨基苯基)-3-吗啉酮。方法:采用HederaTM苯基硅烷键合相色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相A为乙腈,流动相B为乙腈-10
mmol·L-1磷酸二氢钠溶液(pH
3.5)(10:90),梯度洗脱,流速1.2mL·min-1,柱温30℃,检测波长242
nm。结果:杂质4-(4-氨基苯基)-3-吗啉酮质量浓度在20.12201.2
ng·mL-1范围内线性关系良好(r=0.998 1),检测限为10.10
ng·mL-1,定量限为30.30
ng·mL-1,平均回收率为97.4%(RSD=2.8%,n=9),重复性良好(RSD=2.0%,n=6)。3批原料药中未检出4-(4-氨基苯基)-3-吗啉酮。结论经方法学验证,本法适用于利伐沙班中4-(4-氨基苯基)-3-吗啉酮的测定。

液-质联用法测定人血浆中利伐沙班的浓度.Determination of rivaroxaban in
human plasma by HPLC-MS/MS

程璐; 陈军;武汉市中西医结合医院药学部;

【摘要】
目的:建立液-质联用测定人血浆中利伐沙班浓度的方法。方法:采用Thermo
Hypurity C18色谱柱(150 mm×2.1mm,5μm);流动相:5
mmol·L-1醋酸铵-乙腈(70∶30);流速:0.3
ml·min-1;柱温:30℃;MRM模式检测(离子对436.1/144.9),内标法定量。结果:血浆利伐沙班浓度在0.6~300
ng·ml-1范围内线性关系良好(r=0.999
7)。低浓度点RSD小于20%,其余浓度点RSD均小于15%。血浆样品冻存(-20℃)30
d稳定性良好,反复冻融3次及提取后室温放置6
h条件下,样品浓度均无显著变化。结论:所建方法快速简便、灵敏准确,本法可用于利伐沙班血浆中浓度的测定以及药动学研究。

抗血栓药物

利伐沙班达比加群酯是目前最有前景的两种抗血栓药物,与传统抗血栓药物肝素的本质区别在于它不需要抗凝血酶Ⅲ参与,可直接拮抗游离和结合的Xa因子。而肝素则需要有抗凝血酶Ⅲ才能发挥作用,且凝血酶原复合物中的Xa因子无效。这两种新型口服抗凝药物被医学界誉为抗凝血治疗和潜在致死性血栓预防领域的一项重大进展,将成为心血管类药物发展史上新的里程碑。

利伐沙班(Rivaroxaban)由德国拜耳医药和美国强生公司联合研发成功。2008年10月,在加拿大和欧盟获得批准上市,商品名为Xarelto。利伐沙班是全球第一个口服的直接Xa因子抑制剂,可高选择性、竞争性抑制游离和结合的Xa因子以及凝血酶原活性,以剂量-依赖方式延长活化部分凝血活酶时间板(PT)和凝血酶原时间(aPTT),从而延长凝血时间,减少凝血酶形成。其具有生物利用度高,治疗疾病谱广,量效关系稳定,口服方便,出血风险低的特点。

利伐沙班也是防治静脉血栓的药物。临床上主要用于预防髋关节和膝关节置换术后患者深静脉血栓(DVT)和肺栓塞(PE)的形成。也可用于预防非瓣膜性心房纤颤患者脑卒中和非中枢神经系统性栓塞,降低冠状动脉综合征复发的风险等。

图片 3

达比加群酯(Dabigatran)是德国勃林格殷格翰公司开发的具有多种特点的新型抗凝血药物。2008年4月,首先在德国和英国上市,商品名为Pradaxa。这是继华法林之后50年来首个上市的抗凝血口服新药,是抗凝血治疗领域和潜在致死性血栓预防领域的又一个里程碑。

达比加群酯是一种新型的合成的直接凝血酶抑制剂,是用于口服的前体药物,属非肽类的凝血酶抑制剂。口服经胃肠吸收后,在体内转化为具有直接抗凝血活性的达比加群酯。药物结合于凝血酶的纤维蛋白特异结合位点,阻止纤维蛋白原裂解为纤维蛋白,从而阻断了凝血瀑布网络的最后步骤及血栓形成。

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